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SISTEMA DE CAPTURA Y MICRODISECCIÓN LÁSER (LCM)
ARCTURUS XT - NIKON ECLIPSE TI

Descripción

El LabMicroLas pone a su disposición la infraestructura de uso común (Sistema de Captura y Microdisección Láser) a la comunidad académica del Instituto de Ecología y a instituciones externas a éste. La asistencia y el apoyo técnico que se ofrece pueden comprender diversos escenarios. En este sentido, para reconocer adecuadamente las contribuciones del personal del LabMicroLas, se recomienda tomar en cuenta los siguientes criterios de reconocimiento.El Arcturus XT proporciona la máxima flexibilidad en lo que respecta a la preparación de muestras y corte de tejidos a nivel celular. Este sistema está configurado de forma modular para que pueda ser aprovechado por diversos grupos que utilizan diferentes modelos unicelulares, animales y vegetales. Con el ArcturusXT – Nikon eclipse Ti del LabMicroLas, será posible seleccionar en tiempo y espacio poblaciones celulares provenientes de tejidos o poblaciones complejas tales como tumores cancerígenos, nichos de células troncales, neuronas con actividades específicas, microorganismos patógenos o con funciones de interés ecológico, entre otros. La posibilidad de aislar estas poblaciones sin causar alteraciones en la expresión genética o el metabolismo permitirá hacer análisis comparativos a nivel masivo del tipo transcriptómicos o metabolómicos. Esto permitirá hacer un uso más eficiente de la infraestructura técnica y humana que, afortunadamente, se ha obtenido recientemente y con un gran esfuerzo en Unidades de Secuenciación, Biología Molecular y Proteómica en distintas instituciones. Finalmente, la capacidad de generar estos datos experimentales resulta en la necesidad de formar colaboraciones inter y multidisciplinarias que permitan generar respuestas a problemas sociales, de salud y de ciencia básica.

Especificaciones

• ● Microscopio: Nikon Eclipse® Ti-E. Operación estándar del microscopio fuera del software del LCM.
• ● Láseres: láser de captura IR: estado sólido (810 nm); láser de corte UV: estado sólido, bombeo de diodo Q-switch (349 nm) con corriente láser ajustable (0–100%) y frecuencia de pulso (10–5,000 Hz).
• ● Iluminación: Por lámpara de halógeno y epifluorescencia de 100W.
• ● Objetivos: 2x, 10x, 20x y 40x Nikon CFI60.
• ● Magnificación intermedia: óptica de 1.5x.
• ● Platina: Platina motorizada con precisión de 1 μm para insertar tres portaobjetos de 75 mm x 25 mm, placa adicional para insertar caja de Petri: 50 mm x 7 mm.
• ● Métodos de contraste: campo claro, contraste de fases (PhL, Ph1, Ph2) y contraste por interferencia diferencial (DIC)/Nomarski.
• ● Cámara de microdisección: CCD a color de 1024 x 768 1/3 "con obturador electrónico a 1/10 000 seg e integración en el chip a 30 segundos.
• ● Software: Arcturus XT V3.3.

1. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System - Brochure
2. Applied Biosystems® ArcturusXT™ - Overview
3. ArcturusXT Laser Capture Microdissection System Quick Reference Guide
4. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection (LCM) System User Guide v2

APLICACIONES DEL SISTEMA LCM

El Sistema de Captura y Microdisección Láser (LCM) Arcturus XT – Nikon Eclipse Ti es el primer modelo comercializable que combina un láser IR para capturar tejidos y un láser UV para cortarlos. En conjunto, hacen de este sistema un herramienta precisa y flexible para el aislamiento de especímenes con altos fines de pureza y poco daño celular. Las muestras aisladas pueden ser caracterizadas con diferentes técnicas de análisis, de ahí sus aplicaciones en:

• ● Oncología (la expresión genética diferencial)
• ● Proteómica (Expresión de proteínas en nichos de células específicas, Geles-2D, Espectrometría de Masas)
• ● Genética (Análisis de mutaciones y expresión genética, RT-PCR, microarreglos)
• ● Neurobiología
• ● Ciencias forenses (Análisis de ADN en muestras forenses)

La selección y/o aislamiento de las muestras celulares deseadas será posible mediante cortes realizados con un láser de alta potencia con intensidad y pulso regulable, gracias a lo cual es posible ajustar la intensidad necesaria para cortar muestras con diferente resistencia al corte, al tiempo que se utiliza la mínima potencia necesaria para evitar daños en las células aledañas al corte. Una innovación importante del Sistema de Captura y Microdisección Láser ArcturusXT-Nikon Eclipse Ti es que la captura se realiza fijando las muestras a una membrana por medio de un láser infrarrojo, lo cual evita el calentamiento y consecuente alteración de las células durante la etapa de su aislamiento.

A diferencia de métodos como el "cell sorting", utilizados también para seleccionar poblaciones específicas, la microdisección láser no requiere disgregar previamente los tejidos, lo cual puede alterar drásticamente las propiedades físicas, bioquímicas y de expresión genética de las células. Este instrumento cuenta además con un sistema de microscopía de epi-fluorescencia para observar especímenes marcados con fluoróforos específicos o que presenten alta autofluorescencia y así, permitir la selección celular.

El sistema combina la captura por láser infrarrojo (IR) y el corte por láser ultravioleta (UV) que se puede utilizar en cualquier tipo de portaobjetos y muestras preparadas. Puede elegir entre portaobjetos de vidrio (Glass Slides), de membrana/vidrio (PEN Membranes Glass Slides), de membrana enmarcada (PEN Membranes Frame Slides), o caja de Petri para células vivas (Microdissection Petri Dish).

La captura del tejido, grupo de células o célula única se puede realizar por medio de una película termoplástica que es activada por un láser de IR, esta película está adherida a un “Cap” pudiendo ser del tipo “LCM MicroCap” o “HS LCM Cap”, como lo muestra el video. En esta película termoplástica se adherirá el tejido que se desee aislar.



Prácticamente, cualquier tipo de preparación de muestra podría ser utilizada:

• ● Secciones delgadas o gruesas de organismos vivos
• ● Tejidos congelados o fijados con formalina.
• ● Secciones teñidas, teñidas con fluorescencia o sin teñir
• ● Especímenes hidratados o deshidratados.
• ● Cultivos celulares

Las metodologías y protocolos de microdisección de este instrumento están en continuo desarrollo ajustándose a las necesidades específicas de los usuarios. Para tener un panorama general de las técnicas de microdisección láser que se pueden realizar en el ArcturusXT – Nikon Eclipse Ti (Applied Biosystems), eche un vistazo a la siguiente documentación:

https://www.thermofisher.com/mx/es/home/life-science/gene-expression-analysis-genotyping/laser-capture-microdissection.html?SID=fr-lcm-main
5. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection - Optimized Protocol for Laser dissection of living cells and microgenomics – Applications-A
6. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System – Applications-B
7. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System Large Format Slide Stage Insert Installation Guide
8. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System Petri Dish Stage Insert Installation Guide
9. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System Tips Sheet – Fluorescence
10. ArcturusXT™ Laser Capture Microdissection System User Guide
11. ArcturusXT™ LCM System Troubleshooting Guide v1
12. ArcturusXT™ Microdissection Instrument Software Release Notes

MICROSCOPÍA ÓPTICA
ARCTURUS XT - NIKON ECLIPSE TI

Descripción

Con el Sistema Arcturus XT – Nikon Eclipse Ti, también es posible realizar microscopía óptica convencional tal como:

• ● Microscopía de Campo Claro
• ● Microscopía de Contraste de Fases (Ph1, Ph2, Ph3, PhL)
• ● Microscopía de Contraste por Interferencia Diferencial (DIC)
• ● Microscopía de epi-fluorescencia

Objetivos: 2x, 10x, 20x, 40x, 60x y 100x Nikon CFI60.

Estos tipos de microscopía complementan, junto con el módulo Arcturus XT, el Sistema de Captura y Microdisección Láser.